МИНИСТЕРСТВО
СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА
И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ
РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
(Минсельхозпрод России)
ДЕПАРТАМЕНТ ВЕТЕРИНАРИИ
23.09.98г. 13-7-2/1405
НАСТАВЛЕНИЕ
по применению сывороток анти-
токсических Кл. перфрингенс ти-
пов А, С, Д диагностических
1. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ
1.1. Сыворотки антитоксические Кл. перфрингенс типов А, С, Д диаг-
ностические представляют собой нативные сыворотки крови овец, гиперимму-
низированных антигенами соответствующего типа Кл. перфрингенс. По внеш-
нему виду это прозрачная или слегка опалесцирующая жидкость соломенно-
желтого цвета. На дне ампул допкускается небольшой осадок.
Сыворотки применяются для диагностики заболеваний, вызываемых у
животных указанным видом микроорганизмов и типизации культур в реакции
нейтрализации (РН) основных летальных токсинов. Сыворотку расфасовывают
по 4 куб.см в стерильные ампулы по и запаивают или флаконы стеклянные. Ам-
пулы с сывороткой упаковывают в картонные коробки с наличием гнезд и пе-
регородок, обеспечивающих неподвижность и целостность ампул. В каждую
коробку вкладывают наставление по применению сыворотки.
На каждую коробку с ампулами наклеивают этикетку, на которой указы-
вают: наименование и товарный знак предприятия-изготовителя, полное наи-
менование препарата, номер серии, номер контроля, дату изготовления, коли-
чество АЕ в 1 куб.см сыворотки, срок годности, количество ампул, условия хране-
ния и обозначение технических условий.
1.2. При всех заболеваниях животных с клиникой энтеротоксемии иссле-
дуют на присутствие летальных токсинов Кл. перфрингенс содержимое тонкого
отдела кишечника свежих трупов телят, ягнят, поросят и овец.
1.3. Диагностические сыворотки антиперфрингенс типов А, С, Д перед
использованием разводят физиологическим раствором до содержания 5 анти-
токсических единиц (АЕ) в 1 куб.см и в разведенном виде применяют для поста-
новки реакции нейтрализации токсинов. Хранят сыворотки в темном, сухом
месте при температуре от 2 до 15°С. Срок годности - 2 года со дня изготовле-
ния.
2. ПОДГОТОВКА МАТЕРИАЛОВ К ИССЛЕДОВАНИЮ
2.1. Содержимое наиболее пораженных участков тонкого отдела кишеч-
ника с целью отделения грубых частиц фильтруют через несколько слоев мар-
ли. Если оно густое, то разводят физиологическим раствором 1:1 или 1:2 (в за-
висимости от густоты материала), экстрагируют при температуре 20-23гр.С в те-
чение 1 ч., затем фильтруют через бумажный фильтр или центрифугируют в те-
чение 20 минут при 3-5 тыс. об/мин.
2.2. Полученную после фильтрования или центрифугирования жидкость
проверяют на токсичность путем внутривенного в боковые хвостовые вены или
внутрибрюшинного введения белым мышам (массой 16-18 г) в дозе 0,5 куб.см.
При наличии токсина животные погибают в течение 12 часов. В случае гибели
животных в более поздние сроки (до 24 ч) проводят бактериологические иссле-
дования павших белых мышей с целью исключения сопутствующих инфекций
по общепринятым методикам.
2.3. При определении токсичности культур Кл. перфрингенс используют
популяции микроорганизмов, выращенных на среде Китта-Тароцци в течение
8-16 ч. Культуры центрифугируют при 3-4 тыс. об/мин в течение 10-15 мин и
каждый центрифугат проверяют на токсичность в активированном и неактиви-
рованном видах путем внутривенного введения белым мышам. Для активиза-
ции часть центрифугата подщелачивают 10% раствором едкого натра до рН
8,0-8,2 и добавляют 0,25 процента сухого панкреатина или 0,05 процента сухого
трипсина с последующим выдерживанием при 37-38°С в течение 2-х ч.
Определение токсичности культур проводят на белых мышах массой 16-
18 г, которым внутривенно или внутрибрюшинно в объеме 0,5 куб.см вводят ис-
следуемые культуры. Срок наблюдения за зараженными животными 24 час.
После активирования токсичность культур типа Д значительно увеличивается,
а токсичность культур типа С резко снижается. Если мыши гибнут быстрее от
активированных центрифугатов, значит исследуемая культура относится к типу
Д, т.к. летальные токсины других типов Кл.перфрингенс при воздействии про-
теолитических ферментов значительно снижают свою токсичность.
3. ПОСТАНОВКА РЕАКЦИИ НЕЙТРАЛИЗАЦИИ
3.1. Реакцию нейтрализации используют для определения типа основных
летальных токсинов Кл. перфрингенс в содержимом кишечника животных и в
культуральных жидкостях микроорганизмов указанного вида.
3.2. Реакцию ставят на белых мышах массой 16-18 г. С этой же целью
можно использовать морских свинок, у которых на боку, ближе к сагитальной
линии спины выщипывают или выстригают шерсть. На следующий день в это
место вводят смесь сыворотки с токсином.
3.3. Для определения типа основного токсина в четыре пробирки разли-
вают исследуемый материал по 1,0 куб.см и добавляют типовые сыворотки: в пер-
вую пробирку - сыворотку типа А, во вторую - типа С, в третью - типа Д, в чет-
вертую добавляют 1,0 куб.см физиологического раствора (контроль), смесь иссле-
дуемого материала и сывороток выдерживают 45 мин при 37°С±0,5°С.
Смесь из каждой пробирки вводят внутривенно или внутрибрюшинно по
0,5 куб.см двум белым мышам или внутрикожно по 0,2 куб.см двум морским свинкам.
Одновременно в тех же дозах вводят испытуемую культуру без сыворотки
(контроль). Для каждой сыворотки используют отдельный шприц. Наблюдение
за животными ведут в течение 48 час.
3.4. Учет результатов.
Результаты реакции нейтрализации учитывают при гибели контрольных
белых мышей или образовании некроза у контрольных морских свинок.
Животные, получившие смесь токсина с гомологичной антитоксической
сывороткой, остаются живы, а у морских свинок некроз не развивается.
Тип возбудителя определяют по следующей схеме:
Тип Кл. перфрингенс Токсин в исследуемом материале Антитоксическая сыворотка Контроль
А С Д
А альфа - - +- +- +
С бета + - + +
Д эпсилон + + - +
( + ) - белые мыши пали, у морских свинок - некроз на месте введения;
(-) - белые мыши живы, у морских свинок некроз отсутствует;
(± ) - результат не учитывается.
В случае возникновения осложнений, а также несоответствия препарата
требованиям, указанным в наставлении, применение данной серии препарата
прекращают и , в соответствии с указанием ГУВ МСХ РФ № 22-7/28 от 8 мая
1992 г. "О порядке предъявления рекламаций на ветпрепараты отечественного
производства и закупаемые по импорту", сообщают об этом предприятию-
изготовителю препарата и Всероссийскому государственному научно-
исследовательскому институту контроля, стандартизации и сертификации ве-
теринарных препаратов (123022, г. Москва, Звенигородское шоссе 5). Одновре-
менно в ВГНКИ и Государственному Учреждению Центральной научно-
методической ветеринарной лаборатории (111622, Москва, ул. Оранжерейная д.
23) направляют почтой или нарочным по 1 коробке препарата.
Наставление разработано Всероссийским государственным научно-
исследовательским институтом контроля, стандартизации и сертификации ве-
теринарных препаратов.
С утверждением настоящего наставления утрачивают силу
"Методические указания по применению диагностических антитоксических сы-
вороток Кл. перфрингенс типов А, С, Д, Е" утвержденных ГУВ МСХ СССР
30.01.1979 г., № 115-6а.
Одобрено Советом по ветеринарным препаратам Департамента ветери-
нарии Миисельхозпрода РФ 18.06.98г. протокол № 3.