Наставление
по применению антигена кампилобактериозного
для реакции агглютинации с вагинальной слизью (РАВС)
ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ
ПОРЯДОК ПОСТАНОВКИ РАВС
УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ РЕАКЦИИ
ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ РАВС
ПОРЯДОК ПРЕДЪЯВЛЕНИЯ РЕКЛАМАЦИЙ
МИНИСТЕРСТВО
СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА
И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ
РОСcИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
(Минсельхозпрод России)
ДЕПАРТАМЕНТ ВЕТЕРИНАРИИ УТВЕРЖДАЮ
Заместитель руководителя
Департамента ветеринарии
№ 13-7-2/1690 от 09 июля 1999 г. В.В.Селиверстов
НАСТАВЛЕНИЕ
по применению
антигена кампилобактериозного
для реакции агглютинации
с вагинальной слизью (РАВС)
1.ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ
1.1. Антиген кампилобактериозный применяется для постановки реак-
ции агглютинации с вагинальной слизью (РАВС), предназначенной для диагно-
стики кампилобактериоза крупного рогатого скота.
1.2. Антиген представляет собой гомогенную серовато-белого цвета
взвесь инактивированных формалином кампилобактерий подвида venerealis с
концентрацией 10,0 млрд. микробных клеток в 1,0 куб.см 0,3%-ного
формалинизированного физиологического раствора. При длительном отстаивании
антигена допускается выпадение микробных клеток на дно ампулы (флакона) в виде
осадка, легко разбивающегося при встряхивании.
1.3. Антиген расфасовывают по 2,0, 4,0 или 5,0, 10,0 куб.см соответственно
в ампулы или флаконы, на которых несмываемой краской должна быть нанесена
надпись или наклеена этикетка с указанием наименования предприятия-
изготовителя, сокращенного наименования препарата - "Антиген кампилобак-
териозный для РАВС", его количества, номера серии, номера контроля, даты
изготовления, срока годности, обозначения стандарта.
Допускается другая фасовка антигена, согласованная в установленном
порядке.
Ампулы (флаконы) с антигеном упаковывают в картонные коробки с раз-
делительными перегородками.
В каждую коробку с ампулами (флаконами) вкладывают наставление по
применению антигена.
1.4. Антиген в ампулах (флаконах) с трещинами, во флаконах с нарушен-
нои укупоркой, содержащий посторонние примеси, плесень и с истекшим сро-
ком годности подлежит выбраковке в установленном порядке.
1.5. Срок годности антигена 12 мес. с даты изготовления при условии
хранения в сухом темном месте при температуре от 4 до 12 гр.С.
2. ПОРЯДОК ПОСТАНОВКИ РАВС.
2.1. Для иммунологического исследования на кампилобактериоз ис-
пользуют экстракт вагинальной слизи от телок или коров, подозреваемых в
заболевании (при расстройствах полового цикла).
2.2. Вагинальную слизь берут от животных в период полового покоя, не
имеющих патологических выделений из влагалища (гной, примесь крови и
т.п.).
2.3. Тампон, изготовленный из квадратного куска марли размером 10 х 10
см с привязанной к нему крепкой ниткой длиной 60 - 70 см, помещают в стек-
лянную трубку со сточенными краями длинной 40 - 45 см (нитку пропускают
через трубку). Трубку оборачивают бумагой и стерилизуют автоклавированием
при 1 атм в течение 30 мин.
2.4. Перед получением вагинальной слизи наружные половые органы жи-
вотного обмывают теплой водой с мылом.
2.5. Стерильные трубку с тампоном освобождают от бумаги и вводят жи-
вотному во влагалище до шейки матки, максимально предохраняя его от за-
грязнения. В трубку вводят металлический, пластмассовый или деревянный
стержень и выталкивают тампон во влагалище. Трубку со стержнем извлекают
наружу, а тампон оставляют во влагалище.
2.6. Через 30 - 40 мин тампон извлекают за нитку из влагалища, также
предохраняя его от загрязнения и помещают с помощью пинцета в пробирку с
5,0 куб.см 0,3%-ного формалинизированного (расчет по формальдегиду здесь и
далее везде) 3%-ного раствора хлористого натрия. Тампоны, загрязненные фека-
лиями, гнойными массами или кровью, для исследования не пригодны.
2.7. Пробирку, с помещенным в нее тампоном, закрывают резиновой
пробкой, встряхивают и выдерживают в холодильнике при температуре
(1-4)гр.С в течение 12 - 14 ч, после чего тампон отжимают пинцетом и
удаляют из пробирки, а жидкость центрифугируют при 2,5 - 3,0 тыс. об/мин. в
течение 30 мин.
2.8. Реакцию ставят с бесцветной прозрачной надосадочной жидкостью
(экстракт вагинальной слизи). В штатив устанавливают 4 пробирки. В первую
и вторую пробирки вносят по 0,5 куб.см экстракта вагинальной слизи, а затем во
2-ю,3-ю и 4-ю - по 0,5 куб.см 0,3%-ного формалинизированного 3%-ного раствора
хлористого натрия.
2.9. Содержимое второй пробирки пипетируют и в объеме 0,5 куб.см перено-
сят в третью пробирку, из третьей - после идентичной манипуляции, в таком
же объеме - в четвертую, из четвертой - после идентичной манипуляции, в таком
же объеме в стакан с любой дезинфицирующей жидкостью.
2.10. Антиген перед применением встряхивают до получения гомогенной
взвеси и разводят в соотношении 1:10 (к 1 куб.см антигена добавляют 9
куб.см 0,3%-ного формалинизированного 3%-ного раствора хлористого натрия).
2.11. Антиген в разведении 1:10 в объеме по 0,5 куб.см вносят во все 4
пробирки с приготовленными разведениями надосадочной жидкости.
2.12. При постановке РАВС антиген одновременно контролируют на:
- активность: в пробирки с моноспецифической агглютинирующей сыво-
роткой против кампилобактерий подвида venerealis, разведенной 0,3%-ным
формалинизированным 3%-ным раствором хлористого натрия последовательно
двукратно от 1:25 до 1:1600 (0,5 куб.см), вносят по 0,5 куб.см антигена,
- специфичность: в пробирки с моноспецифической агглютинирующей
сывороткой против кампилобактерий подвида bubulus, нормальной сывороткой
крови крупного рогатого скота и кролика, разведенными 0,3%-ным формалини-
зированным 3%-ным раствором хлористого натрия последовательно двукратно
от 1:25 до 1:200 (0,5 куб.см) вносят по 0,5 куб.см антигена,
- самоатглютинацию: в пробирку вносят по 0,5 куб.см антигена и 0,3%-ного
формалинизированного 3%-ного раствора хлористого натрия.
2.13. Пробирки с реагентами встряхивают и помещают в термостат при
температуре (37-38)гр.С на 16-18 ч, после чего выдерживают их при
температуре (18-22)гр.С в течение 1 ч и учитывают результаты реакции.
3. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ РЕАКЦИИ
3. 1 . Результаты реакции учитывают в крестах по следующей схеме;
++++ (4креста) - полное просветление жидкости над агглютинатом в виде
"рыхлого зонтика", полностью покрывающего дно пробирки. При встряхивании
"зонтик" поднимается в виде паутинки и разбивается на крупные хлопья или
комочки, а надосадочная жидкость остается прозрачной;
+++ (3 креста) - просветление жидкости со слабо выраженной опалесцен-
цией над агглютинатом в виде "рыхлого зонтика", полностью покрывающего
дно пробирки. При встряхивании "зонтик" поднимается в виде паутинки и раз-
бивается на хлопья или комочки средней зернистости, а надосадочная
жидкость становится слегка мутной;
++ (2 креста) - заметное просветление жидкости над агглютинатом в виде
"компактного зонтика", покрывающего около 50% площади дна пробирки. При
встряхивании "зонтик" разбивается на мелкие хлопья или комочки, а надоса-
дочная жидкость становится мутной;
+ (1 крест) - слабо выраженное просветление жидкости над агглютина-
том в виде "компактного зонтика", занимающего около 25% площади дна про-
бирки. При встряхивании агглютинат разбивается на мельчайшие плохо види-
мые комочки, надосадочная жидкость мутная;
- (минус) - просветление жидкости и образование агглютината не регист-
рируется. На дне пробирки в центре может быть осадок из микробных клеток,
при встряхивании поднимающийся в виде косички.
3.2. 0 качестве антигена судят по результатам контроля, учет которых
проводят перед учетом основной реакции.
Антиген должен давать положительную реакцию с моноспецифической
агглютинирующей сывороткой против кампилобактерий подвида venerealis в
титре не ниже 1:800 и отрицательные реакции с моноспецифической агглюти-
нирующей сывороткой против кампилобактерий подвида bubulus, нормальной
сывороткой крови крупного рогатого скота титре 1:100 и выше, нормальной
сывороткой крови кролика в титре 1:50 и выше, не самоагглютинироваться с
0,3%-ным формалинизированным 3%-ным раствором хлористого натрия.
4. ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ РАВС.
4.1. Положительная - агглютинация антигена с оценкой на 3 - 4 креста в
первой и второй, или во всех четырех пробирках с разведениями экстракта
вагинальной слизи;
4.2. Отрицательная - агглютинация антигена с оценкой на 1 - 2 креста в
первой и второй, или отсутствие агглютината во всех четырех пробирках с
разведениями экстракта вагинальной слизи.
4.3. Данный метод диагностики кампилобактериоза крупного рогатого
скота является ориентировочным. При получении положительной РАВС у жи-
вотных в хозяйстве, благополучном по кампилобактериозу, необходимо провес-
ти бактериологическое исследование биологического материала от тех же жи-
вотных.
Диагноз на кампилобактериоз считается установленным только в случае
выделения из биологического материала от крупного рогатого скота культуры
кампилобактерий вида fetus - подвидов venerealis и вида jejuni, каждого
отдельно или в разных сочетаниях.
5. ПОРЯДОК ПРЕДЪЯВЛЕНИЯ РЕКЛАМАЦИЙ.
5.1. В случае несоответствия препарата требованиям, указанным в на-
стоящем наставлении, применение антигена данной серии прекращают и, в со-
ответствии с указанием Главного управления ветеринарии Минсельхоза России
от 8 мая 1992 года №22-7/28 "0 порядке предъявления рекламаций на ветпре-
параты отечественного производства и закупаемые по импорту", сообщают об
этом предприятию-изготовителю. Всероссийскому государственному научно-
исследовательскому институту контроля, стандартизации и сертификации вете-
ринарных препаратов - ВГНКИ (123022, Москва, Д-22, Звенигородское шоссе,
5) и Центральной научно-методической ветеринарной лаборатории - ЦНМВЛ
(111622, Москва, Оранжерейная, 23).
Одновременно в ВГНКИ направляют 3 ампулы (флаконам антигена дан-
ной серии.
С утверждением настоящего наставления утрачивает силу "Наставление
по применению кампилобактериозного (вибриозного) антигена для реакции
агглютинации с вагинальной слизью (РАВС)", утвержденное 21.05.1980 г. ГУВ
МСХ СССР.
Наставление разработано ВГНКИ.